Presidencia de la Nación

Detección cuantitativa de la deposición de calosa en plasmodesmos y vasos conductores de muestras vegetales.




Grupo de trabajo

Leandro Ortega
Mattio Fernanda
Del Vas Mariana
Proyecto: 2023-PD-L01-I083 . Coordinador: Mariana Del Vas

Sobre la tecnología

El equipo de especialistas del Proyecto: 2023-PD-L01-I083 realiza la cuantificación de depósitos de calosa en tejidos vegetales teñidos con azul de anilina, mediante el análisis de imágenes de microscopía confocal con el software FIJI.








Problemas o necesidades que resuelve

La acumulación de calosa en plasmodesmos (Pd) y vasos de floema es un mecanismo de regulación de la difusión de moléculas entre células y como defensa contra la invasión de patógenos, que se ha observado en muchas especies vegetales. Es una respuesta primaria de defensa que se ha visto correlacionada con el nivel de resistencia de las plantas al ataque de patógenos, especialmente fúngicos.
Al ser un indicador tan significativo, la tinción de este polisacárido se ha convertido en una valiosa herramienta para evaluar su deposición y monitorear la permeabilidad de Pd asociada a diferentes condiciones fisiológicas, el cual es un carácter factible de ser utilizado en programas de mejoramiento.
Por esta razón hay una demanda real de la oferta de esta técnica como servicio y la institución posee todos los requerimientos necesarios para implementarla en forma rutinaria y eficiente.

Propuesta

La tinción se realiza incubando las muestras, previamente fijadas y conservadas en EtOH 70%, en una solución 0.01% (p/v) de Methyl Blue (Sigma 95290-5G) por 1h. Las imágenes se obtienen en un microscopio Nikon Eclipse Csi, en modo confocal estándar con iluminación laser de diodo 405nm y filtros de emisión BP 450/35 y 515/30. Se trata de la versión del programa ImageJ de código abierto, específica para el análisis de bioimágenes.

Ventajas

1.No existe este servicio como tal en ninguna dependencia del INTA.
2.Aplica a muestras vegetales de diverso origen; no sólo cultivos y sin necesidad de que sean frescas.
3.Utiliza recursos ya existentes en nuestra institución.
4.Posible parámetro para la evaluación de valor agregado en origen.

Estado de avance de la tecnología

Se ha realizado una puesta a punto de la tinción con anilina de muestras de hojas de plantas de maíz sanas y enfermas con el mal de Río Cuarto (MRCV). Se agregó un paso de clarificación de las muestras que permitió obtener imágenes más nítidas y transparentes de los tejidos antes de la tinción con anilina. Se ajustaron los parámetros para la obtención de imágenes por microscopía confocal que permitieron ver diferencias interesantes y esperables, entre muestras control y testigo de este patosistema.
Se están haciendo ajustes del procesamiento de imagen en el programa FIJI para una óptima automatización de la etapa de cuantificación de esta técnica.
Restan hacer pruebas de validación para la especificidad del método y una evaluación de la capacidad de procesamiento de muestras por día y precio del servicio.

Palabras clave

#calosa |#fluorescencia |#microscopía confocal |#análisis |#imágenes |#vegetales |#muestras |#tejidos |#anilina

Contacto

Gastón VAGHI MEDINA
[email protected]
INTA Córdoba
Dirección Nacional Asistente de Vinculación Tecnológica
Buenos Aires - Argentina

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